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鼠尾胶原蛋白I  细胞培养

鼠尾胶原蛋白I 细胞培养

简要描述:

鼠尾胶原蛋白I 细胞培养 ,胶原蛋白是结缔组织和内脏器官细胞外基质的主要构造成分,但在皮肤、肌腱、骨骼中分布较为广泛。从遗传和结构上胶原蛋白分为许多类型。

产品时间:2021-07-13

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Collagen, Type I, from Rat Tail 鼠尾胶原蛋白I

 

搜索关键词:

Extracellular Matrix (ECM) 细胞外基质;Gelatin 明胶;Collagen Type I 胶原蛋白I型Poly-L-lysine 多聚L-赖氨酸Fibronectin 纤连蛋白;Matrigel基质胶; CAS:9007-34-5 

 

 

产品信息:

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Collagen, Type I, from Rat Tail 鼠尾胶原蛋白I

MX0910-2ML

2ml (10mg)

450

Collagen, Type I, from Rat Tail 鼠尾胶原蛋白I

MX0910-10ML

10ml (50mg)

2000

 

基本介绍:

胶原蛋白是结缔组织和内脏器官细胞外基质的主要构造成分,但在皮肤、肌腱、骨骼中分布为广泛。从遗传和结构上胶原蛋白分为许多类型。胶原蛋白I(Collagen, Type I)是由2个α1链和1个α2链组成的异源多聚体,在37,中性pH下自发形成三螺旋骨架,是一种优秀的细胞培养用基质,广泛用于肝细胞、成纤维细胞、脊神经节、肌肉细胞、施万细胞、胚肺细胞、上皮细胞和其他大量细胞系。还能用于研究细胞生长、分化、迁移以及发育过程中的组织形态发生。

 

懋康生物提供的鼠尾胶原蛋白I是根据Birkedal-Hansen方法,通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备。可用于包被细胞培养器皿,培养细胞表面粘附性,特别适合那些在普通培养器皿表面不易贴壁的细胞,比如成纤维细胞、肝细胞等原代细胞。还可用于三维胶的制备,模拟真实的生长环境,使得细胞在三维环境中生长。

本品为溶于6mM HAc的无菌溶液,浓度5mg/ml,每个批次产品皆通过细胞培养测试(包括三维空间培养)以保证质量的可靠性。

 

注意事项

  • 整个操作请于冰上进行,因室温鼠尾胶原I可迅速成胶,操作过程尽量保持低温。
  • 整个操作请在无菌环境下无菌操作,避免污染以影响细胞生长。
  • 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法

1. 细胞培养器皿的表面包被

组织培养器皿的表面包被推荐浓度为1-5µg/cm2,起始浓度可首玄5µg/cm2。建议根据具体细胞类型来优化。

1.1 6mM HAc稀释液的制备

本品以溶于6mM HAc(=0.36g/L HAc)的无菌溶液形式提供,本身不溶于中性pH,建议用6mM HAc溶液做进一步稀释。

配制方法:取34.5µl 冰醋酸(17.4 M)加入100ml双蒸水,充分混匀后即得到6mM HAc溶液,0.22µm滤膜过滤除菌后待用。

 

1.2 包被步骤

a,根据自身实验体系以及优化后的包被浓度来计算所需的胶原蛋白量,并加入相应孔内,确保胶原蛋白溶液*覆盖表面。

  • 以包被浓度为5µg/cm2,先用6mM HAc稀释液将胶原蛋白(5mg/ml)稀释到合适的中间浓度,如50µg/ml,

然后参考表1 不同培养皿内胶原蛋白加量表 来加量到各孔内;

  • 以包被浓度为2µg/cm2,先用6mM HAc稀释液将胶原蛋白(5mg/ml)稀释到合适的中间浓度,如12µg/ml,然后参考表1 不同培养皿内胶原蛋白加量表来加量到各孔内;

表1 不同培养皿内胶原蛋白加量表

培养皿类型

每孔/皿表面积(cm2

当包被浓度:2µg/cm2,中间稀释浓度:12µg/ml,加入该稀释液的体积(µl)

当包被浓度:5µg/cm2,中间稀释浓度:50µg/ml,加入该稀释液的体积(µl)

96 well

0.3

50

30

24 well

1.9

300

190

12 well

3.8

600

380

6 well

9.5

1580

950

35mm

8

1330

800

60mm

21

3500

2100

100mm

55

9170

5500

b,室温孵育1h,小心吸掉多余液体,用无菌PBS清洗3~4次后直接使用。或者加完胶原蛋白溶液后,在超净台内开盖过夜晾干。无菌条件下,包被好的器皿在4-25至少可保存3个月。

2. 三维胶原的制备

鼠尾胶原蛋白I使用浓度>1mg/ml,pH 7.0左右皆可形成具有一定强度的三维胶,建议成胶浓度为1-2 mg/ml。

由于本品是以溶于6mM HAc的无菌溶液形式提供,在成胶过程需先加入0.06倍体积的0.1M NaOH中和。

2.1 需要溶液准备(无菌、预冷)

2.2 三维胶原制备(不含细胞)(以配制1ml,1mg/ml三维胶为例):

2.3 三维胶原制备(含细胞)(以配制1ml,1mg/ml三维胶为例):

 

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

 

 

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