BCA蛋白浓度测定试剂盒（增强型）蛋白定量

Enhanced BCA Protein Quantification Kit

BCA蛋白浓度测定试剂盒（增强型）

产品关键词：

BSA 牛血清白蛋白；BCA蛋白定量试剂盒；Bradford蛋白定量；Coomassie Brilliant Blue G250 考马斯亮蓝G250；CAS NO：979-88-4；

产品信息

产品描述

BCA法是目前应用比较广泛的蛋白浓度测定方法。基于双缩脲反应，即在碱性环境下蛋白质将Cu²⁺还原成Cu⁺，产生一种紫蓝色复合物，在562nm处有高的吸光值，该反应产物的量与蛋白浓度成正比。BCA蛋白浓度测定法实现了蛋白浓度测定的简便、灵敏、快速、稳定和高兼容性。

BCA蛋白浓度测定试剂盒（增强型）与传统方法比较，具备以下特点：1）灵敏度更高，小检测蛋白量达到0.2μg，检测浓度下限达到10μg/ml；2）速度快，比一般的BCA蛋白浓度测定试剂盒显色所用时间短。3）现性范围宽，20-1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系；4）不受绝大部分样品中化学物质的影响，对于 5%以内的SDS，Triton X-100，Tween 20、60、80具有很好的兼容性。但BCA法受螯合剂和略高浓度的还原剂影响，需确保样品中EDTA＜10mM，DTT＜1mM，β-ME＜0.01%，以及不含EGTA。

我司提供三种规格的BCA蛋白浓度测定试剂盒（增强型），酶标法分别可做500T，2500T和5000T。

产品组分

使用方法

1.       蛋白标准品的准备

2.       BCA工作液的配制

根据样品数量，按试剂（A）:试剂（B）=50:1的比例配制BCA工作液，即取50份BCA试剂A和1份BCA试剂B， 充分混匀，即获得BCA工作液。例如取5ml BCA试剂A和0.1ml BCA试剂B，配制成5.1ml BCA工作液。BCA工作液室温24小时内稳定。

3.       蛋白浓度的测定

注意事项

1）   蛋白标准BSA粉末溶解于蛋白标准配制液后，即获得蛋白标准原液，该原液中含有防腐剂，不影响后续检测，该蛋白标准原液应放在-20℃长期保存。

2）   待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中，否则待测蛋白与蛋白标准所含非蛋白成分不*，有可能导致测定不准确。

3）   待测蛋白和蛋白标准加入BCA工作液后，如果发现检测效果不佳，可以室温放置2h或60℃放置30min，颜色会随着时间的延长不断加深。显色反应也会随温度升高而加快。如果浓度较低，可以适当延长孵育时间或在较高温度下孵育。

4）   测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化，可能的原因是样品中含有严重干扰BCA法测定蛋白浓度的物质（详见资料-BCA法的兼容性）。

5）   建议每次测定都做标准曲线。因为BCA法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。

6）   如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但应考虑根据比色皿的小检测体积。应按比例适当加大BCA工作液的用量使总体积不小于小检测体积，样品和标准品的用量亦相应按比例放大。

7）   为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当加热，但是切勿过热，否则易失效。

8）   BCA法检测样本中不应含有EGTA，否则影响检测结果。

9）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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