Phalloidin Conjugates 鬼笔环肽偶联物

　　Phalloidin Conjugates 鬼笔环肽偶联物背景介绍：

　　肌动蛋白(Actin)是一种分子量~42kDa的细胞骨架蛋白，几乎存在所有真核细胞中。也是一种zui高度保守蛋白，藻类和植物之间序列差异不超过20%。肌动蛋白是细胞中两种纤维的单体亚基：微丝(Microfilaments)，又称肌动蛋白丝(Actin filaments)，细胞骨架三种主要成分之一;细肌丝(Thin filaments)，肌肉细胞收缩丝的一部分。因此，肌动蛋白参与许多重要的细胞生理过程，包括肌肉收缩、细胞运动、细胞分化和胞质分列、囊泡和细胞器运动、细胞信号，以及细胞连接和细胞形状的搭建和维持。

　　单体形式存在的称为球形肌动蛋白(Globular actin，G-actin)，具有紧密的结合位点介导其与另外两个单体肌动蛋白进行头-尾相互作用，从而使得单体激动蛋白聚合形成纤维(Filamentous actin，F-actin)【见图1.肌动蛋白丝的组装和结构】。

　　图1. 肌动蛋白丝的组装和结构。(A)G-actin聚合形成F-actin。*步生成二聚体和三聚体，然后通过逐步添加单体蛋白到两端来生长。(B)G-actin的结构。

　　鬼笔环肽(Phalloidin)，又称鬼笔鹅膏素，是从毒蘑菇鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)中分离到的一种七肽毒素，以*的亲和力和特异性结合肌动蛋白丝F-actin(聚合形式的肌动蛋白)，不会结合单体肌动蛋白(G-actin)。不像一些肌动蛋白抗体，同时识别单体和聚合形式的肌动蛋白。

　　◎Phalloidin Conjugates 鬼笔环肽偶联物 产品应用：

　　1)用来标记、鉴定和定量肌动蛋白丝(F-actin);

　　2)体外稳定肌动蛋白丝(F-actin);

　　3)体外观察固定或活细胞中肌动蛋白丝(F-actin)的定位、分布，以及观测单一的F-actin;

　　4)高分辨率下研究肌动蛋白网络

　　◎ 产品特点：

　　1)应用范围广：甲醛固定和透化处理的组织切片、培养细胞，以及无细胞实验体系;无物种差异性;

　　2)亲和力高、稳定性强：解离常数Kd约3×10–8M;

　　3)特异性强：特异结合F-actin，不会结合G-actin，背景明显低于Actin抗体染色，几乎无特异性染色，且不受物种限制。

　　4)毒性小：鬼笔环肽及衍生物分子量小，对F-actin影响小。经标记后的F-actin仍维持许多未标记actin的功能特征包括与肌球蛋白的相互作用。

　　5)灵敏度高：nM浓度即可达到染色需求;

　　6)适合多重标记实验：提供多种鬼笔环肽荧光偶联物，选择范围广，能实现多重标记;

　　◎ 染色流程【图2】：

　　◎ 染色示例：

　　图3. Jasplakinolide (Jas)或Cytochalasin D (Cyto D)对HSC-T6细胞肌动蛋白骨架重组的生理效应。HSC-T6细胞分别经DMSO (vehicle control)，Jas (100 nM) or Cyto D (1 μM)处理1h，之后4%多聚甲醛固定15 min。之后phalloidin-FITC(MX4403)染色肌动蛋白丝，细胞核用DAPI(MX4207)复染。荧光显微镜下成像检测。

　　图4. HeLa细胞经iFluor™ 488 Phalloidin染色后荧光显微　　镜检测图(FITC滤片设置-绿色)。

　　图5. HeLa细胞经iFluor™ 647 Phalloidin染色后荧光显微镜检　测图(Cy5滤片设置-红色)。

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　　【注】：iFluor™系列的荧光光谱同Alexa Fluor™系列，荧光稳定性和荧光强度几乎与Alexa Fluor™*，是传统荧光探针FITC, TRITC, 5-TAMRA等的升级品。

　　◎ 相关产品：【见我司整理的细胞松弛素Cytochalasin产品专题】。