一、为什么我们需要酵母感受态细胞?
通常，在实验过程中需外源DNA引入到酵母细胞。引入基因片段(线性ssDNA或质粒)是通过酵母细胞的转化来实现的，具体方法有化学法，如醋酸锂和聚乙二醇(PEG)或电穿孔法。有效的酵母转化需要高质量的酵母感受态细胞为开始。胜任力则是指细胞能吸收游离的细胞外的遗传物质(如质粒DNA)的能力。
二、酵母感受态细胞的制备获得感受态细胞相当简单，但许多研究人员在实现良好的生存比例和转换效率时 遇到问题。常见的误区包括由于制备条件恶劣导致高的细胞死亡率，或由于无效的感受态细胞制备导致转化效率低。虽然酵母细胞和大肠杆菌一样容易生长和转化，但它们需要不同的处理方法来制备感受态细胞和转化。酵母细胞像哺乳动物细胞一样，有类似的处理程序。典型的酵母感受态细胞制备方法如下:
1.过夜培养你想转化的酵母菌菌株，使用营养丰富的培养基培养不含质粒的细胞。
2.对于已经含有质粒的细胞，使用适当的选择性培养基来维持质粒。
3.当细胞密度达到1 - 2 x 107cells/mL，离心收获细胞。细胞密度可以通过使用分光光度计在OD600检测，或者使用血球计在显微镜下计数细胞。
4.冲洗细胞，重悬于无菌水，离心，弃上清，重复此步骤两次以*清洗细胞。zui后一次洗完，将细胞重悬于感受态细胞溶液，分装，大约每管108个细胞，每个转化反应将使用这些数量的细胞。
5.分装好的管子放于-80°C，供以后实验使用。在所有步骤中,使用质量好的无菌过滤器消毒过的试剂,以防止污染问题。
上一篇：了解一下工具酶的分类有哪些下一篇：植物生长调节剂的成分机理分析